Alvaro Bautista ist der Pole-Mann für das 250er Rennen in Mugello. Der Spanier bezwang Lokalmatador Marco Simoncelli in einem Herzschlagfinale um gerade einmal 0,014 Sekunden. Hinter Bautista und Simoncelli sicherte sich Hector Barbera den dritten Startplatz in der ersten Reihe. Selbst ein kurzer Ausflug ins Kiesbett konnte Barbera nicht aus dem Konzept bringen.

Bester Honda-Pilot wurde Hiroshi Aoyama auf Position 4. Ihm fehlten rund zweieinhalb Zehntel auf die Pole-Zeit von Bautista. Die Top-6 komplettierten Alex Debon und der Schweizer Tom Lüthi.

Die spektakulärste Aktion des Qualifyings zeigte Raffaele De Rosa, der in den Schlussminuten der Session nur noch seitlich an seinem Motorrad hing, durch den Kies pflügte, zurück auf die Strecke steuerte und dann mit einer akrobatischen Leistung wieder aufstieg. Am Ende wurde er dafür mit Startplatz 9 belohnt.