Das erste Training der 250er-Klasse in Brünn war ein knapper Zweikampf zwischen Marco Simoncelli und Mika Kallio. Die beiden WM-Konkurrenten tauschten die Bestzeit mehrmals untereinander aus, bevor Simoncelli am Ende 48 Tausendstel vor dem KTM-Piloten aus Finnland lag. Bereits ein wenig abgeschlagen wurde Alvaro Bautista Dritter. Drei Zehntel fehlten dem Spanier auf die Spitze. Alex Debon und Hector Barbera fuhren die Ränge vier und fünf ein.

Hinter Roberto Locatelli konnte sich Thomas Lüthi Position sieben sichern und ihm folgten Hiroshi Aoyama, Mattia Pasini und Julian Simon, womit KTM alle drei Maschinen in die Top Ten brachte. Recht schwierig verlief das erste Training für den Wildcard-Fahrer Toni Wirsing. Der Pilot vom Racing Team Germany hatte sechs Sekunden Rückstand auf die Bestzeit und belegte damit den 24. und letzten Rang.