Weltmeister Marco Simoncelli fuhr im 2. Freien Training der 250er Klasse in Mugello die schnellste Zeit. In 1:52.589 Minuten ließ er seinen ersten Verfolger Hector Barbera um über sechs Zehntel hinter sich. Der Spanier setzte sich wiederum nur knapp gegen Karel Abraham durch, der zweieinhalb Zehntel hinter Barbera auf Rang 3 landete.

Die Top-6 komplettierten Hiroshi Aoyama, Alvaro Bautista und Alex Debbon - vom Ersten bis zum Sechsten lagen 1,5 Sekunden. Der 125er Weltmeister Mike di Meglio kam mit 1,7 Sekunden Rückstand auf Position 8.

Tom Lüthi hielt die Schweizer Fahnen auf Position 15 hoch. Der Schweizer Aprilia-Pilot hatte nach 24 Runden einen Rückstand von fast drei Sekunden auf die Spitze. Immerhin fuhr er seine schnellste Zeit im vorletzten Anlauf kurz vor Trainingsende.