Die besten Bedingungen am Samstagmorgen in Indianapolis hatte die 250er Klasse. Rund 30° Luft -und 32° Streckentemperatur boten gute Voraussetzungen für die Abstimmungsarbeiten. Die Bestzeit holte sich Hector Barbera, allerdings nur 0,025 Tausendstel vor WM-Spitzenreiter Marco Simocelli. Der Italiener hatte zwar keinen guten Start ins Training konnte sich aber stetig steigern.

Die ersten Zehn werden von Alex Debon, Mika Kallio, Alvaro Bautista, Hiroshi Aoyama, Lukas Pesek, Hector Faubel, Julian Simon und Mattia Pasini komplettiert.

Überschattet wurde das Training der 250er-Klasse durch einen heftigen Sturz vom Schweizer Tom Lühti. Der Ex-125cc-Weltmeister stürzte schon in der Anfangsphase des Trainings und musste mit der Ambulanz von der Strecke gebracht werden, weshalb das Training kurzfristig unterbrochen wurde. Das Emmi-Cafe-Latte Team konnte noch keine genauen Angaben zum Unfall und seinen Folgen machen.

Der Inhaber der Freitags-Pole, Karel Abraham wurde mit seiner Aprilia im Training nur 13.