Die erste Bestzeit des Assen-Wochenendes in der 250er-Klasse ging am Donnerstagnachmittag an Alvaro Bautista. Der Spanier fuhr eine 1:40.817 und konnte damit Hector Barbera um rund zwei Zehntelsekunden auf den zweiten Platz verweisen. Der dritte Trainingsrang ging an Bautistas Aspar-Teamkollegen Mike di Meglio, der bereits sechseinhalb Zehntel auf die Bestzeit verloren hatte. Hinter Alex Debon kam auf Platz fünf das große Fragezeichen der Session.

Mattia Pasini hatte die halbe Session in der Box gesessen und gewartet. Anscheinend musste erst grünes Licht von Aprilia kommen, dass er die Maschine auch wirklich einsetzen darf, die immerhin schon für ihn vorbereitet war. Aufgrund von finanziellen Unstimmigkeiten hatte es am Mittwoch sogar noch so ausgesehen, als könnte Pasini das Wochenende gar nicht bestreiten. Mit Verspätung ging es dann los und er wurde Fünfter. Lukas Pesek auf Rang sechs folgte Marco Simoncelli.

Der Italiener war allerdings die letzten Minuten der Session gar nicht im Einsatz gewesen. Er hatte sich kurz nach der Halbzeit über das Vorderrad in den Kies verabschiedet und fuhr danach nicht mehr aus. Verletzt schien er nicht zu sein. Der WM-Zweite, Hiroshi Aoyama, Balatonring-Team-Ersatzfahrer Aleix Espargaro und der Schweizer Thomas Lüthi machten die Top Ten komplett.